冻存的原代细胞应该如何培养？

原代细胞(primaryculturecell)指的是从身体中取出的细胞，被迅速培养出来。有的人将培养的1代细胞和传10代以下的细胞统称为原代细胞培养。不仅原代细胞被广泛地用于分子、细胞生物学和生物医学的基础研究，如蛋白质组学、基因组学、细胞系研究、DNA、RNA及遗传研究等。

一、冷冻原代细胞培养。

1.将一个管状的细胞从液氮罐中移出，以保护手和眼睛。

2.迅速将冻存管置于37℃水浴中，轻握并转动，直至里面的物体完全融化。

3.立即从水浴中取出冷冻管，擦干，转到无菌环境。

4.用70%酒精冲洗冻存管，然后清除多余的酒精。

5.打开盖子，注意手指不能碰到内扣(请注意，因为冻存管是负压，打开时可能会有少量溢出，这是正常现象)。

6.培养瓶采用多聚赖氨酸包覆。大多数细胞建议的接种密度是每平方厘米5000个细胞。

7.盖上培养瓶盖，轻轻摇动培养瓶，使细胞均匀分布。如需换气，请打开盖子。

8.把培养瓶放在培养箱里。

9.放入培养盒后6-16小时换一次培养基以除去残留二甲基亚枫和未贴壁细胞。

二、组织块培养原代细胞。

1.接种组织块后的头3天，注意在观察和运动时不要引起液体摆动。为了避免频繁的翻动和震动，组织块不容易粘在瓶壁上或粘附后也会脱落。

2.在培养液中加入不宜过多，避免浸泡的组织块因轻微波动而脱落。

3.在细胞向外迁移之后，注意记录并移除漂浮的组织块和残存的细胞，它们所产生的毒性将影响原始细胞的生长。

4.种植前，可在培养瓶的底壁上用胶原蛋白薄层覆盖，以促进组织块的快速粘贴。

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