如何细胞活化与复苏
很多同龄人在做实验时用细胞,那么我们收到细胞之后该怎么办?
首次收到细胞体包裹时,请确认该细胞系冷冻管处于解冻状态,如有需要立即通知。要尽可能快的开始培养,或者立即冷冻保存。
细胞复原原理-快速融合:
这些细胞必须在196℃快速熔化,这样细胞外冻存的冰晶体就会迅速融化,以防止冰晶体在细胞外冻结时进入细胞形成再结晶,从而破坏细胞。
一、试验前的准备:
1.预热锅至37度。
2.用75%酒精擦拭超净台面上30min的紫外线。
3.将消毒剂的离心管、吸管、培养瓶等放入超净台上。
二.冷冻保存管:
1.根据细胞冻存记录,通过标签找到所需细胞的编号。
2.在检查管外号的情况下,将其中的细胞盒取出,取出所需的细胞。
三.快速解冻:
1.快速将冻存管放进一个预热的锅里解冻,并且要不断摇动,使里面的液体迅速融化。
大约1-2分钟后,冻存管内液体完全溶解,取出酒精棉球擦去冻存管外壁,再将超净台取出。
四.平衡离心:
使用吊板平衡后,3000r/min离心到离心机内3分钟。
五、细胞悬液制备方法:
1.吸去上清液。
将10ml培养液注入离心管中,吹制成细胞悬液。
六.细胞计数:
最好是5×105ml。
细胞冷冻和解冻程序。
1.根据所鉴定的菌株按单确定的基本培养基种类、血清种类和其它认定成分和比例,制作培养基。多数细胞无法立即适应不同的基础培养基或血清类型,如果由于实验的需要不同,必须先慢慢改变培养基组成,确定细胞适应后再进行必要的试验。
2.FBS(fetalbovineserum,胚牛血清)、CS(calfserum,小牛血清)和HS(horseserum,metalbovineserum,metalbovineserum,胚牛血清,CS,calfserum,horseserum,horseserum,molecularcalfserum,metalbovineserum胚胎血清,CS,calfserum,horseserum,horseserum,
3.将培养基置于37°C的水槽中,用70%乙醇擦干,然后置于无菌操作台,使其恢复温度。将冷冻管取出,立即放入37℃的水槽内迅速解冻,水面高度不可接近或超过冰管帽的边缘,否则易被污染。轻轻地摇晃冷冻管,1分钟后全部溶解,然后用70%的ethanol擦拭冰冻管外部,移至无菌操作台上。
4.根据细胞种类和浓度,在无菌操作台中将10ml培养液加到T25或T75flask中。慢慢地把融化过的细胞悬液放入T25或T75flask的培养基中,混合均匀,在37°C,5%CO2培养箱中培养。
5.对大多数细胞而言,冰冻保护剂DMSO低于1%,不会对细胞的粘附或激活产生不良影响,无需立即从解冻细胞中取出,待第二天才能确定细胞生长或贴附良好。由于对DMSO敏感或可导致细胞分化,极少数细胞需立即清除DMSO。